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    蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB )

    標簽: western-blot 免疫印跡 蛋白質

    蛋白質免疫印跡(Western Blot )可以:(1)從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質;(2)定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況;(3)用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。

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    底物化學發光ECL法:

    實驗方法原理

    Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。

    與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。

    經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

     

    實驗材料

    蛋白質樣品

    試劑、試劑盒

    丙烯酰胺 SDS  Tris-HCl β-巰基乙醇 ddH2O 甘氨酸 Tris 甲醇 PBS NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 ddH2O 考馬斯亮蘭 乙酸 脫脂奶粉 硫酸鎳胺 H2O2 DAB試劑盒

    儀器、耗材

    電泳儀 電泳槽 離心機 離心管 硝酸纖維素膜 勻漿器 剪刀 移液槍 刮棒


    Western印跡法:

    實驗材料

    蛋白質樣品

    試劑、試劑盒

    裂解液 PBS G 250考馬斯亮藍溶液 NaCl SDS 上樣緩沖液 電泳緩沖液 轉移緩沖液 麗春紅染液 封閉液 TBST TBS 洗脫抗體緩沖液 顯影液 定影液 抗體 化學發光試劑

    儀器、耗材

    高壓鍋 玻璃勻漿器 高速離心機 分光光度儀 -20℃低溫冰箱 垂直板電泳 轉移裝置 恒溫水浴  搖床 多用脫色搖床



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